厌氧培养箱的使用方法

二、形成厌氧环境

1. 第一次氮气置换：

   • 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧。
   • 接通氮气进气路，打开氮气控制阀，使两只塑料袋充足氮气后，关闭电磁阀，然后扎紧袋口。
   • 把塑料袋内氮气渐渐地放于操作室内，至全部放出。

2. 第二次氮气置换：重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时开闭排气阀。

3. 第三次氮气置换：再次重复充氮过程，确保操作室内氮气浓度。

4. 混合气体置换（混合气体配比根据实际需求，如N2 85%、H2 10%、CO2 5%或H2 1/85%、H2 1/10%、CO2/15%等）：

   • 调换气路打开操作室混合气阀进气，充气时取样室先抽真空，并注意随时开闭排气阀。
   • 混合气充满塑料袋后，关闭电磁阀，并打开混合气限流阀，使混合气经过稳流器、流量计，调整流量计使流量为每分钟10毫升左右。
   • 把塑料袋内混合气渐渐排于操作室内。通过三次换气后，操作室内气体含氧量已处于极微量状态。

5. 催化除氧：操作室内打开钯粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧。1~2小时后（具体时间根据设备性能而定），打开厌氧指示条观察其变色情况，如指示条变色（由深蓝变为浅蓝）则为操作室内达到厌氧环境。

三、灭菌处理

开启紫外线灭菌灯，对操作室内进行灭菌处理。灭菌时间根据实验需求自定。

四、菌种置入与培养

1. 检查并关紧取样室内门。
2. 打开取样室外门：将菌种放入取样室后即关上外门。
3. 取样室充氮置换：打开真空泵，先抽真空度（如500毫米汞柱以上），然后人工打开氮气阀进气，使指针回复零位后关掉氮气阀。重复此过程三次，以确保取样室内氮气浓度。第三次操作时，可打开混合气体阀进混合气，使指针回复零位后关掉混合气体阀。
4. 检验真空度：如选定真空度较低则需要增加置换的次数。取样室外门开启、关紧后，再抽低真空度（如100毫米汞柱）进行检验。

五、长期连续使用条件

1. 定期观察：每天在操作室内打开厌氧指示条观察，如指示条变色不正常则需重新换气。
2. 连续输入混合气体：要长期连续输入微量的混合气体，使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收，保证室内厌氧状态。补入混合气流量可选定为每分钟10毫升左右。
3. 更换除氧剂和干燥剂：连续培养运行时，每天更换一次除氧剂和干燥剂。换下的除氧剂和干燥剂可放在200℃干燥箱内干燥2~3小时以复原。

六、注意事项

1. 设备安装：整机应安放在温度温差较小、操作方便的位置，避免阳光直晒和远离采暖设备，放置要平稳。
2. 仪表安装：仪表应尽可能地安装于空气清静、温度变化较小的地方。
3. 熟悉设备：开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的说明书，掌握正确的使用方法。
4. 故障处理：如发生故障（如停气等），操作室内仍可保持一段时间（如10~12小时）的厌氧状态。超过此时间则根据需要把培养物取出另作处理。
5. 气瓶更换：调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体。
6. 真空泵维护：真空泵应按要求使用，并定期检查加油。

通过以上步骤，可以正确、有效地使用厌氧培养箱进行厌氧菌的培养。